HPLC 法测定人参毛状根及不同人参样品中 9 种人参皂苷的含量

来源:药学实践杂志2016年7月25日第34卷第4期   作者:陈泠 李春艳 王政 贾敏 韩婷   发布时间:2020-6-28

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科人参属植物,其干燥根和根茎同名入药,始载于《神农本草经》,列为上品,是我国常用传统中药。人参味甘、微苦,性微温,归肺、脾、心、肾经,具有大补元气,补脾益肺,生津止渴,安神益智等功效。现代临床主要用于治疗心气虚证、冠心病、心律失常等疾病,是应用最广泛、研究最深入的中药之一,主要分布在我国辽宁省东部、吉林省东半部和黑龙江省东部。

现代研究表明,人参含有人参皂苷、氨基酸及挥发油等成分,对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、免疫系统、内分泌系统及泌尿生殖系统有广泛的作用,能增强机体对有害刺激的抵抗力。人参的有效成分主要是人参皂苷,可分为三类:五环三萜类的齐墩果烷型皂苷——人参皂苷 Ro ;原人参二醇型的四环三萜类达玛烷型皂苷——人参皂苷 Rh2、Rg3、Rb1、Rb、Rc ;原人参三醇型的四环三萜类达玛烷型皂苷——人参皂苷 Re、Rf、Rg1。毛状根技术是20世纪80年代后期发展起来的一项新兴的生物技术 。

发根农杆菌 A grobacterium rhizogenes 的质粒在感染植物细胞时,其所含的 T-DNA 能稳定地整合到植物细胞基因组中并诱导产生大量毛状根,利用这种发根农杆菌的生物技术来侵染宿主人参 P.ginseng C.A.Mey.,并使其产生转基因的人参毛状根,此项技术所转化的人参毛状根具有生长周期短 、遗传性状稳定和激素自养等特点,在人参次生代谢的研究中是较为理想的组织培养物。因此,利用人参毛状根技术为人参及其人参皂苷、人参多糖等次生代谢物的生产开辟了新的途径。

实验结果表明,人参毛状根中的人参皂苷 Rh2含量高于其他样品,其各皂苷含量不低于药材饮片,有些甚至高于主根。由此可知,人参毛状根不仅生长迅速、遗传稳定、培养方便,其皂苷类成分也相对较高,是一种高效的培养体系。本研究首次运用HPLC法测定人参毛状根中9种人参皂苷的含量,进一步建立基于人参毛状根平台研究人参与环境关系的技术体系,也为利用毛状根技术工业化生产人参次生代谢产物提供科学依据。《药典》规定,人参药材按干燥品计算,含人参皂苷 Rg1 和人参皂苷 Re的总量不得少于0.30%,人参皂苷 Rb1 不得少于0.20%,人参饮片含人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Re 的总量不得少于0.27%,人参皂苷 Rb1 不得少于0.18%,本研究测试的人参主根、须根、茎、叶、果和人参毛状根均符合药材标准,人参饮片也符合《药典》中的饮片标准。

本研究首次进行原植物人参、人参毛状根和人参饮片的9种人参皂苷比较,建立了高效、可靠、精准的 HPLC 测定方法,可用于各类人参样品中9种皂苷成分的测定。从研究结果来看,人参药材和人参饮片的皂苷成分符合《药典》标准。原植物人参须根和叶可进一步加强利用,人参果中的 Re 和人参毛状根中的 Rh2也可用于单成分的提取利用。人参毛状根的皂苷成分高,培养方便、生长迅速,可作为理想的实验平台,为研究环境对人参的影响提供参考。

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